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CRISPR-Cas9基因編輯技術在免疫細胞轉染中的應用研究進展
發布時間： 2026-06-29 點擊次數： 83次CRISPR-Cas9基因編輯技術的出現為免疫細胞功能改造提供了重要工具。通過轉染導入Cas9蛋白和單向導RNA可以在基因組特定位點產生雙鏈斷裂利用細胞的非同源末端連接或同源定向修復機制實現基因敲除敲入或精確修飾。在免疫學研究領域CRISPR-Cas9技術已被應用于T細胞NK細胞和巨噬細胞等多種免疫細胞的功能研究中。
在T細胞免疫治療研究中利用CRISPR-Cas9技術敲除程序性死亡受體1基因和內源性T細胞受體基因已成為增強CAR-T細胞抗腫瘤活性的策略。程序性死亡受體1是T細胞表面的檢查點分子其配體在腫瘤微環境中高表達導致T細胞功能耗竭。通過基因編輯敲除程序性死亡受體1可以解除這種抑制作用提升CAR-T細胞的持久性和殺傷能力。同時敲除內源性T細胞受體可以減少移植物抗宿主病風險為通用型CAR-T細胞治療奠定基礎。
將CRISPR-Cas9組分遞送進入免疫細胞是技術實施的關鍵環節。目前常用的遞送方式包括電穿孔法和核糖核蛋白復合物直接轉染法。核糖核蛋白復合物是將Cas9蛋白與向導RNA在體外預先組裝形成復合物然后通過電穿孔導入細胞內。與質粒遞送相比核糖核蛋白遞送具有脫靶效應低和轉染后起效快的特點因為Cas9蛋白在細胞內存在時間較短完成編輯后即被降解。Zeta life公司的轉染試劑配合優化的電轉方案可用于提高核糖核蛋白復合物進入原代免疫細胞的效率。
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